.Restriction digestion of the gene

.Restriction digestion of the gene and the vector Here the vector to be used is pET28a and pMD18-T vector.
-Then both the vector
-And the gene insert is incubated with the respective restriction enzymes for the
desired time
After the restriction digestion the vector and the gene so digested is run in the agarose gel electrophoresis for purification purpose.
-The band showing the corresponding vector band and the gene band is cut and then eluted by the help of the gel extraction kit
Ligation of the gene and vector :-
The gene and the vector are ligated by the help of the ligase enzyme. There after the entire gene vector construct is again visualized in the agarose gel by the help of the electrophoresis
Transformation of the gene – vector construct into the competent cells:-
-Suitable host is used for transformation of the gene vector construct. The host can be E.coli BL21 cells - or DH5 α cells.
-The cells colonies are picked and subjected to the PCR with the same conditions of the amplification
-The colonies having the recombinant plamids are amplified and will show the positive band on the gel
Isolation of the recombinant plasmind
The recombinant plasmid is isolated by the alkaline lysis method. Alkaline lysis is the protocol used to isolate plasmid DNA by breaking the cells open.
-Here the cell containing plasmid and(SDS, PAGE)
7- Expression of the gene :-
1mM IPTG final concentration. Then the total cells are boiled and the protein comes out. The protein so obtained is subjected to run in the SDS PAGE for expression

النتائج (العربية) 2:

.Restriction الهضم من الجين وناقلات هنا متجه لاستخدامها هو pET28a وpMD18-T ناقلات.
-Then كل من ناقلات
-وإدراج الجينات وحضنت مع تقييد كل منهما الانزيمات لل
وقت المطلوب
بعد تقييد الهضم متجه ويتم تشغيل الجينات هضم ذلك في الكهربائي للهلام الاغاروز لغرض تنقية.
هو قطع -The الفرقة تبين الفرقة ناقلات المقابلة والفرقة الجين ومن ثم مزال بمساعدة من استخراج الهلام عدة
من ربط الجين وناقلات: -
إن و تربط الجينات وناقلات بمساعدة انزيم يغاز. هناك بعد تصور كامل بناء ناقلات الجينات مرة أخرى في هلام الاغاروز بمساعدة من الكهربي
تحول الجين - ناقلات بناء في الخلايا المختصة: -
يستخدم المضيف، مناسبة للتحول من بناء ناقلات الجينات. المضيف يمكن أن يكون خلايا القولونية BL21 - أو الخلايا α DH5
خلايا -يتم اختار المستعمرات وتخضع لPCR مع نفس ظروف التضخيم
وتتضخم -The المستعمرات وجود plamids المؤتلف وسوف تظهر الفرقة إيجابية على هلام
عزل المؤتلف plasmind
يتم عزل البلازميد المؤتلف من طريقة تحلل القلوية. تحلل القلوية هو بروتوكول يستخدم لعزل DNA البلازميد عن طريق كسر خلايا مفتوحة.
-Here الخلية التي تحتوي على البلازميد و(SDS، PAGE)
7- التعبير عن الجينات: -
1MM IPTG التركيز النهائي. ثم يتم غلي مجموع الخلايا والبروتين يخرج. يخضع البروتين التي تم الحصول عليها وذلك لتشغيل في SDS PAGE للتعبير

النتائج (العربية) 3:

- هضم التقييد الجينات ناقلات هنا استخدام ناقلات هو pet28a pmd18-t ناقلات.إذن كل من ناقلاتو الجين حضنت تضاف مع كل تقييد الانزيمات لالوقت المطلوببعد هضم التقييد ناقلات الجينات حتى يتم تشغيل مهضوم في الاغاروز الكهربائي الهلامي لغرض تنقية.- الفرقة عرض المناظرة ناقلات فرقة الجينات هو قطع ثم استخرج من مساعدة من جل استخراج عدةالبوق من الجينات ناقلات: -الجينات ناقلات هي ربط مساعدة ليغاز الانزيم.هناك بعد كل الجينات ناقلات بناء مرة أخرى تصور في الاغاروز هلام يساعد رحلانتحول في الجينات – بناء ناقلات في الخلايا المختصة:- مناسبة استضافة يستخدم في تحويل الجينات ناقلات بناء.المضيف يمكن القولونية bl21 الخلايا أو خلايا Dh5 α.- خلايا تكون مستعمرات التقطت ويخضعون الاسترداد مع نفس الظروف من التضخيمالمستعمرات لها المؤتلف plamids تضخمت وسوف تظهر إيجابية الفرقة على جلعزل plasmind المؤتلفالبلازميد المؤتلف هو عزل القلوية تحلل الأسلوب.تحلل القلوية هو بروتوكول يستخدم لعزل الحمض النووي البلازميد عن طريق كسر الخلايا مفتوحة.- هنا خلية تحتوي على البلازميد و (النشر في الصفحة)7 - التعبير عن الجينات: -السيليكون iptg التركيز النهائي.ثم مجموع الخلايا يتم غليه و البروتين يخرج.البروتين حتى الحصول عليها يخضع تشغيل في صفحة الحزب في التعبير